14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  icon

14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и



Название14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и
страница4/9
Дата конвертации11.02.2013
Размер1.18 Mb.
ТипАвтореферат
источник
1   2   3   4   5   6   7   8   9
^

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ


В качестве антигенов использовались коммерческие препараты исследуемых ферментов производства фирмы «Sigma» (США):

- препарат супероксиддисмутазы из эритроцитов человека (Superoxide Dismutase from human erythrocytes , Cat. № S 9636);

- препарат глутатионредуктазы (Glutathione Reductase from Bakers yeast, Cat. № G 3664);

- препарат глутатионпероксидазы (Glutathione Peroxidase from human erythrocytes, Cat. № G 4013);

- препарат аденозиндезаминазы (Adenosine Deaminase from bovine spleen, Cat. № А 5043);

- препарат гуаниндезаминазы из печени кролика (Guanase from rabbit liver, Cat. № G 5752);

- препарат ксантиоксидазы микробного происхождения (Xanthine oxidase, Cat.№ Х 2252).

Для получения полиакриламидных гранул использовали метод эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в нашей модификации [Гонтарь И.П., 2001, патент № 2356585, 2007]. Полученные гранулы имели правильную сферическую форму с размером частиц 10 - 100 мкм.

Для получения иммобилизированных форм изучаемых ферментов подбирали растворы с оптимальной концентрацией: для СОД – 1,4 мг/мл, для ГР – 1,6 мг/мл, для ГП –1,4 мг/мл по белку, для АДА – 100 мкг/мл, для ГДА – 20 мкг/мл, для КО – 50 мкг/мл.

Учитывая, что эритроцитарная СОД имеет небольшую относительную молекулярную массу (30000 - 32000 а.е.м.) и данные литературы о возможной диффузии биологических макромолекул с подобной молекулярной массой [Закревский В.И., 1980], иммобилизацию фермента проводили путем пришивки его молекулы глютаровым альдегидом к инертной полиакриламидной грануле, содержащей магнитный материал. Иммобилизацию осуществляли по методу, описанному A.K.Johansson a. al.(1974). Было определено, что максимальная сорбция СОД на гранулы, активированные глютаровым альдегидом, составила 980 мкг белка на 1 мл (70 %).

Влияние процесса иммобилизации на функции биологически активных веществ изучали с помощью нативных и иммобилизированных препаратов ферментов. Иммобилизация этих веществ не вызывала изменений их свойств: активность иммобилизированных форм ферментов и растворимых не имели статистически значимых отличий (см. таблицу 7).

Кроме того, иммобилизация повышает устойчивость ферментов к воздействию высоких температур: так после автоклавирования (170°С в течение 1 часа) активность растворимых форм энзимов снизилась до нуля, а иммобилизированных - незначительно.

Таблица 7.

Влияние иммобилизации на биологические свойства ферментов


Фермент

Ферментативная активность

Иммобилизированная форма

Растворимая

форма

СОД, Ед

37,3 ± 0,19

37,5 ± 0,08

ГР, Ед

128,1 ± 0,1

128,4 ± 0,11

ГТП Ед/мг

97,5 ±2,3

93,2 ±3,1

АДА, Ед/мл

57,61,72

61,91,64

ГДА, МЕ/л

58,63,63

62,24,41

КО, мкмоль/л х мин

62,13,44

67,23,94

Среди иммунологических методов диагностики антител в ревматологии наибольшее распространение получили иммуноферментный (ИФА) и иммунофлуоресцентный (ИФЛ) методы анализа. Нами предварительно был проведен сравнительный анализ ИФА и ИФЛ на основе ИГАП с использованием иммобилизированных ферментов в качестве антигенной матрицы. Сравнение двух методик проводилось на примере определения уровня антител к СОД.

Была продемонстрирована корреляция высокой силы между двумя способами определения антител (r=0,64; p<0,001). Однако, проведя исследование уровня антител к СОД двумя методами – ИФА и ИФЛ с использованием ИГАП, нами получено, что максимальное разведение сывороток, при котором выявлены антитела к энзиму, составило 1:50 при ИФЛ и 1:800 при ИФА. Таким образом, ИФА с использованием ИГАП является более чувствительным методом, чем ИФЛ, что соответствует данным литературы [Гонтарь И.П., 2006].

На следующем этапе мы провели сравнение классического ИФА и ИФА на основе ИГАП. Нами установлено, что максимальные значения экстинции в рабочем разведении пула сывороток при традиционном варианте ИФА составили – 0,16±0,005, а при ИФА с ИГАП – 0,22±0,07, при этом минимальный титр пула сывороток больных ССД, где выявлены положительные значения экстинции при традиционном ИФА – 1:400, а при ИФА с ИГАП – 1:800. Таким образом, ИФА с ИГАП является более чувствительным методом диагностики по сравнению с классической методикой. Применение имобилизированных гранулированных препаратов в ИФА повышает чувствительность методики в несколько раз по сравнению с традиционным вариантом за счет увеличения концентрации антигенов в 20-100 раз, а также площади соприкосновения фиксированных антигенов с антителами, частоты встречаемости иммобилизированных антигенов с магнитными свойствами с соответствующими иммуноглобулинами при применении магнитной мешалки [Гонтарь И.П., 1990]. Итак, проведенные исследования показывают большую чувствительность иммуноферментного анализа с ИГАП по сравнению с классической методикой с ИФЛ. Поэтому в дальнейшей работе для выявления антител к ферментам АОС и ПМ мы использовали именно этот метод – ИФА с ИГАП.

С диагностической целью были проведены некоторые иммунологические пробы, позволяющие охарактеризовать иммунный статус больных. Циркулирующие иммунные комплексы определяли методом преципитации с полиэтиленгликолем 6000 по Haskova в модификации Б.А.Лемперта (1988). У больных исследовался антинуклеарный фактор по Coons [Фримель Г., 1987] методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием в качестве субстрата криостатных срезов печени белой крысы в качественном варианте с выделением типа и интенсивности свечения. Исследования по изучению активности ферментов проводились в клинико-биохимической лаборатории НИИ КиЭр РАМН (зав. лаб. д.м.н., профессор Мартемьянов В.Ф.). Активность изучаемых ферментов определялась в сыворотке крови: эритроцитарной СОД по методу Чевари С. и соавт. (1985), плазменной СОД по методу Дубининой Е.Е. и соавт. (1986).; глутатионредуктазы по методу Ченас Н.К. (1989);глутатионпероксидазы по методу Flohe L., Ganzler W.A, 1984; аденозиндезаминазы по методу Martinek R.G. (1963); гуаниндезаминазы по методике Caraway W.T. с использованием цветной реакции Бертелота (1966); ксантиноксидазы (О-форма) по методике Kalckar H.M. в модификации Дячиной Е.Г. (1973).

Капилляроскопия ногтевого ложа.

Исследование капилляров ногтевого ложа выполнено с помощью микроскопа при увеличении 20х. Проводился анализ дистального ряда капилляров на 2-4 пальцах рук. В работе использованы количественный и качественные методы оценки капилляроскопических изменений [Алекперов Р.Т., 2004, Невская Т.А., 2004]. Капилляроскопия проводилась в теплом помещении. Количественный метод включал определение плотности капилляров (среднее число капиллярных петель в дистальном ряду на 1 мм). При проведении качественной оценки учитывалось: наличие гомогенности капилляроскопической картины, равномерной плотности и расширения капилляров; наличие мегакапилляров, кустовидных капилляров, визуально определяемых аваскулярных полей и экстравазатов.

Статистический анализ экспериментальных данных выполнялся с помощью программных пакетов «STATISTICA 6.0 FOR WINDOWS» и SPSS (SPSS for Windows, Release 12.0), а также по оригинальным программам с использованием формул, приведенных в соответствующих руководствах. Представление описательных статистик и выбор статистических критериев производились исходя из цели исследования, решаемых при этом задач и рекомендаций руководств по биостатистике [Реброва О.Ю., 2002, Swinscow T.D.V., 1997]. Выборочные характеристики выражались как среднее (M) и стандартное отклонение (SD), также использовался расчет медианы (Me) и межквартильного размаха (IQR) если распределение показателя отличалось от нормального. В качестве меры неопределенности применялся расчет 95% доверительных интервалов (ДИ). Различия исследуемых групп по частоте выявления качественных показателей оценивали в таблице сопряженности 2X2 с помощью хи-квадрат-теста с поправкой Йетса. Для сравнения групп по количественному признаку использовались критерии Манна – Уитни (MW U-test), Вилкоксона, а изучения связи между ними - метод ранговой корреляции Спирмана. Проводился анализ вероятности наступления изучаемого исхода – анализ выживания методом Каплана – Мейера. Различия и связь признаков считались статистически значимыми при р <0,05.

^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Изучение влияния специфических иммуноглобулинов на ферментативную активность СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО

Изучение влияния антител к ферментам на их активность проводили в опытах in vitro с растворимой и иммобилизированной формами ферментов. Источником специфических иммуноглобулинов служили сыворотки больных ССД с установленным высоким титром антител (экстинкция 0,2 — 0,6 е.о.п.). «Чистые» антитела получали с помощью соответствующего антигенного иммуносорбента. После диализа против забуференного физиологического раствора и последующего концентрирования через полупроницаемую мембрану системы «Sartorius» до первоначального объема сыворотки, антитела использовали в эксперименте по изучению их взаимодействия с ферментом.

Таблица 8.

Сравнительная характеристика активности иммобилизированной и растворимой форм ферментов антиоксидантной системы и пуринового метаболизма после взаимодействия с антителами (М±m)

Фермент

Форма фермента (исходная активность)

Активность фермента после взаимодействия взаимодействия

с антителами (n=30)

с сывороткой доноров

контроль (физ. раствор)

СОД (ЕД/мг)

Иммобилизированная (34,3 ЕД/мг)

10,2±0,06*

33,4±0,14

37,3±0,05

Растворимая (32,2ЕД/мг)

19,3±0,07*

32,3±0,1

37,5±0,07

ГП

(ЕД/мг)


Иммобилизированная (97,5 Ед/мг)

39±0,12*

95,3±0,2

93,4±0,21

Растворимая (93,2 Ед/мг)

65,24±0,19*

91,3±0,17

90,7±0,15

ГР

(ЕД/мг)

Иммобилизированная (112,3 ЕД/мг)

44,9±0,2*

110,4±0,14

111,3±0,05

Растворимая

(106,5 ЕД/мг)

74,6±0,12*

103,3±0,1

100,5±0,07

АДА

(МЕ)

Иммобилизированная (54,3 МЕ)

16,3±2,8*

51,5±3,75

53,2±4,16

Растворимая (56,1 МЕ)

33,7±3,14*

52,3±4,1

53,7±3,97

ГДА

(нмоль/мин/мл)

Иммобилизированная

(1,2 нмоль/мин/мл)

1,6±0,08*

1,2±0,18

1,16±0,2

Растворимая

(1,2 нмоль/мин/мл)

2,04±0,07*

1,3±0,16

1,18±0,2

КО (мкмоль/л/мин)

Иммобилизированная

(3,86  2,65)

5,1±0,3*

3,6±0,5

3,68±0,5

Растворимая (3,8±0,6)

5,7±0,8*

3,5±0,4

3,5±0,4

*- достоверные отличия с контролем и донорами


Количество фермента в иммобилизированной и растворимой формах было сопоставимо. В качестве контроля использовали физиологический раствор и сыворотки доноров (см. таблицу 8).

При проведении исследования активности иммобилизированныхформ ферментов АОС после взаимодействия с антителами in vitro, нами выявлено снижение активности ферментов на 60-70% по сравнению с исходной, кроме того получены статистически достоверные различия с контролем (физиологический раствор) и сыворотками доноров (р<0,05) (см. таблицу 8). При исследовании взаимодействия растворимых форм энзимов нами обнаружено снижение активности ферментов на 30-40%. При проведении исследования активности иммобилизированной формы АДА после взаимодействия с антителами in vitro было выявлено ее снижение на 70% по сравнению с исходной, а при исследовании взаимодействия растворимой формы АДА обнаружено снижение активности фермента на 40%. Эти изменения, вероятно, связаны с блокированием активного центра фермента, являющегося одновременно и антигенной детерминантой. При исследовании взаимодействия растворимых форм энзимов снижение активности ферментов менее выражено, вероятно, в связи с тем, что включение энзима в жесткую структуру геля препятствует существенным пространственным изменениям его молекулы и конформационные изменения структуры молекулы приводят к неполному совпадению активного центра фермента и его антигенной детерминанты.

Кроме того были получены статистически достоверные различия с контролем (физиологический раствор) и донорами (р<0,05) (см. таблицу 8). При проведении исследования активности иммобилизированной формы ГДА in vitro выявлено увеличение активности фермента на 30%, КО на 42% по сравнению с контролем (физ. раствор) и донорами (р<0,05). При исследовании взаимодействия растворимых форм ферментов обнаружено повышение активности фермента ГДА на 70 %, КО на 63% (см. таблицу 8). Одной из причин увеличения активности ГДА в нашей работе является то, что антигенные детерминанты и активный центр фермента, вероятно, не совпадают, а в процессе взаимодействия антиген-антитело происходят значительные конформационные изменения молекулы энзима, способствующие более полному высвобождению частично скрытых SH-групп, непосредственно участвующих в катализе ГДА [Ito S., 2004]. Увеличение активности КО после взаимодействия с антителами может быть связано с конформационными изменеиями молекулы фермента, способствующими трансформации D-формы (КДГ) в О-форму (КО) энзима.

Корреляционный анализ показал наличие статистически значимых связей отрицательного характера между антителами к ферментам и активностью СОД (Spearman R =-0,77), ГП (Spearman R =-0,728), ГР (Spearman R =-0,77), АДА (Spearman R =-0,56) р<0,005; положительных связей - ГДА (Spearman R =0,86), КО (Spearman R =0,85), р<0,005.

После изучения значения активности ферментов в сыворотках больных ССД (см. таблицу 9), было проведено их сравнение с показателями здоровых лиц и получено статистически значимые отличия для всех энзимов (M-W U-test, p<0,05). Анализ изучаемых показателей в группе больных ССД в зависимости от активности патологического процесса, показал снижение активности СОД, ГП, ГР, АДА и увеличение ГДА, КО. Изменение активности ферментов между I и II степенями активности заболевания носило статистически значимые значения (M-W U-test, p<0,05) для всех ферментов, кроме ГДА, а между II и III – только для СОД (M-W U-test, p<0,05).

Таблица 9.

Показатели активности СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО
в сыворотке крови больных ССД в зависимости от активности патологического процесса, M(S)

Контингент

обследуемых

N

СОД

ГП

ГР

АДА

ГДА

КО

Здоровые


30

37,1

3,3

0,17

0,012

117,2

2,8

10,8

1,2

1,14

0,05

3,5

0,4

Больные ОСД

30

30,4#

4,97

0,12#

0,03

104,0#

12,6

8,3#

1,5

1,16

0,4

3,8#

0,5

Больные ПСР


30

28,9#

6,2

0,12#

0,03

103,9#

11,4

8,2#

1,79

1,26#

0,37

4,9#

1,99

Больные ССД

(группа в целом)

83

23,93#*"

5,9

0,11#*"

0,09

77,6#*"

16,1

7,0#*"

1,5

1,41#

0,3

5,1#"

1,6

Больные ССД с
I степенью активности

23

28,9#

6,4

0,11#

0,016

95,3#"*

13,3

8,0#

1,75

1,3

0,29

4,6#

1,5

Больные ССД со II степенью активности

46

22,9

4.3

0,098

0,02

71,2

10,9

6,8

1,3

1,43

0,32

5,4

1,7

Больные ССД с III степенью активности

14

19,1

3,9

0,09

0,008


69,4

12,2

6,1

0,83

1,5

0,3

5,4

1,3

*- статистически значимые отличия с больными ПСР

" – статистически значимые отличия с больными ОСД

# - статистически значимые отличия со здоровыми.

^ СОДЕРЖАНИЕ АНТИТЕЛ К СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА И КО В КОНТРОЛЬНЫХ ГРУППАХ.

Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО уздоровых лиц.

Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО определялось в сыворотке 30 практически здоровых людей и анализировалось в зависимости от пола и возраста. Результаты представлены в таблице 10. Показатели, превышающие эти значения на величину 3 стандартных отклонений, были приняты за верхнюю границу нормы: для Ат к СОД – 0,097, к ГП – 0,079, к ГР – 0,075, к АДА – 0,088, к ГДА – 0,073, к КО – 0,077. Общая активность СОД в группе здоровых лиц составила 37,1±3,3, ГТП – 0,17±0,012, ГР – 117,2±2,8, АДА – 10,8±1,17, ГДА – 1,14±0,05, КО – 3,5±0,36.

Таблица 10.

Уровни антител к СО, ГР, ГТП, АДА, ГДА, КО у здоровых лиц

Показатель

M

ДИ

IQR

S

m

Ат к СОД

0,061

0,057…0,065

0,02

0,012

0,002

Ат к ГП

0,055

0,052…0,058

0,01

0,008

0,001

Ат к ГР

0,054

0,05…0,057

0,01

0,007

0,001

Ат к АДА

0,052

0,048…0,057

0,005

0,012

0,002

Ат к ГДА

0,05

0,046…0,052

0,005

0,008

0,001

Ат к КО

0,047

0,043…0,05

0,01

0,01

0,009

Примечание: М – среднее значение, S – стандартное отклонение, m − ошибка репрезентативности, IQR – межквартильный размах, ДИ – доверительный интервал

Существенных различий уровня антител к энзимам в зависимости от пола и возраста выявлено не было.


^ Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО у больных с очаговой склеродермией.

Антитела к ферментам определялись в сыворотке 30 больных ОСД.

Таблица 11.

Уровни антител к СОД, ГТП, ГР, АДА, ГДА, КО у больных с очаговой склеродермией

Показатель

M

Ме

ДИ

IQR

S

m

Ат к СОД

0,1

0,09

0,084…0,12

0,05

0,029

0,007

Ат к ГТП

0,1

0,07

0,07…0,13

0,05

0,05

0,013

Ат к ГР

0,07

0,07

0,064…0,073

0,05

0,01

0,002

Ат к АДА

0,099

0,08

0,08…0,12

0,0000

0,04

0,009

Ат к ГДА

0,07

0,06

0,05…0,085

0,02

0,03

0,007

Ат к КО

0,07

0,07

0,06…0,07

0,01

0,006

0,001

Примечание: М – среднее значение, Ме – медиана, S – стандартное отклонение, m − ошибка репрезентативности, IQR – межквартильный размах, ДИ – доверительный интервал

Полученные значения антител к ферментам представлены в таблице 11.

Повышенный уровень антител выявлен: к СОД у 20% больных, к ГП – у 13,3%, к ГР – у 3,3%, АДА – 10%, ГДА – 6,7%, КО – 3,3%. Получены статистически значимые отличия уровней антител при ОСД от здоровых (M-W U- test: 30, р=0,0000; 38,0, р=0,0000; 45,0, р=0,0000; 26,0, р=0,0000; 114,5, р=0,002; 27,5, р=0,0000, соответственно).

Активность ферментов в группе больных имела следующие значения: СОД – 30,6±4,9, ГП – 0,12±0,03, ГР – 104,8±12,5, АДА- 8,5±1,6, ГДА - 1,16±0,4, КО – 3,84±0,52 . Выявлена статистически значимая прямая корреляционная связь между активностью ГП и возрастом больных: R=0,52, p=0,05.

Были изучены повышенные уровни специфических иммуноглобулинов к изучаемым ферментам при разных формах очаговой склеродермии, результаты представлены на рисунке 6.

Все повышенные значения антител к энзимам, кроме ГР, чаще выявлялись в крови больных с бляшечной формой ОСД.



Рис.6. Выявление повышенных уровней антител к ферментам при разных формах ОСД


^ Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО у больных с первичным синдромом Рейно

Под наблюдением находилось 30 больных первичным синдромом Рейно. Повышенные значения антител выявлены: к СОД – у 5 (16,7%) человек, к ГП – у 3 (10%), ГР – у 2 (6,7%), АДА – у 4 (13,3%), ГДА – у 3 (10%), КО – у 4 (13,3%). Полученные значения имеют статистически значимые отличия от группы здоровых: U-test = 35,0, p=0,0000; 57, p=0,0000; 24, p=0,0000; 36,5, p=0,0000, 45,5, p=0,0000; 23,0 p=0,0000 - соответсвенно. Значения активности изучаемых ферментов были следующие: СОД – 28,9±6,2; ГП – 0,12±0,03; ГР – 103,9±11,4; АДА – 8,2±1,8; ГДА - 1,25±0,36; КО – 4,9±1,99.

Таблица 12.

Уровни антител к СОД, ГТП, ГР, АДА, ГДА, КО у больных с первичным синдромом Рейно.

Показатель

M

Ме

ДИ

IQR

S

m

Ат к СОД

0,1

0,08

0,08…0,13

0,02

0,04

0,01

Ат к ГТП

0,08

0,07

0,065…0,09

0,0000

0,03

0,006

Ат к ГР

0,07

0,07

0,067…0,08

0,0000

0,013

0,003

Ат к АДА

0,09

0,08

0,078…0,11

0,0000

0,04

0,009

Ат к ГДА

0,088

0,06

0,059…0,12

0,01

0,054

0,013

Ат к КО

0,09

0,07

0,07…0,13

0,0000

0,06

0,014

Примечание: М – среднее значение, Ме – медиана, S – стандартное отклонение, m − ошибка репрезентативности, IQR – межквартильный размах, ДИ – доверительный интервал

Статистически значимых связей между изучаемыми показателями и возрастом, длительностью болезни не обнаружено.


^ Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО у больных ревматоидным артритом

Под наблюдением находилось 20 больных РА. Обнаружены повышенные значения антител к СОД у 8 (40%) пациентов, к ГП - у 9 (45%), к ГР - у 7 (35%), к АДА – у 10 (50%), ГДА – у 7 (35%), КО – у 7 (35%).

Значения активности изучаемых ферментов были следующие: СОД – 26,8±3,4; ГП – 0,12±0,02; ГР – 85,8±12,4; АДА – 7,8±1,7; ГДА - 1,2±0,19; КО – 4,2±0,91.

Таблица13.

Уровни антител к СОД, ГП, ГР, АДА, ГДА, КО у больных ревматоидным артритом.

Показатель

M

Ме

ДИ

IQR

S

m

Ат к СОД

0,11

0,11

0,07…0,2

0,06

0,05

0,01

Ат к ГТП

0,1

0,07

0,065…0,18

0,007

0,05

0,001

Ат к ГР

0,11

0,07

0,06…0,2

0,13

0,06

0,013

Ат к АДА

0,11

0,1

0,06…0,2

0,095

0,05

0,01

Ат к ГДА

0,088

0,07

0,07…0,14

0,01

0,03

0,007

Ат к КО

0,09

0,07

0,07…0,15

0,04

0,03

0,007

Примечание: М – среднее значение, Ме – медиана, S – стандартное отклонение, m − ошибка репрезентативности, IQR – межквартильный размах, ДИ – доверительный интервал

Полученные значения антител к изучаемым ферментам (см. таблицу 13) статистически значимо отличаются от значений здоровых лиц: антитела к СОД – M-W U -test =67,0, р=0,0000; к ГП – M-W U test=36,0, р=0,0000; к ГР - M-W U test=37,0, р=0,0000; к АДА - M-W U test=38,0, р=0,0000; к ГДА - M-W U test=13,0, р=0,0000; к КО - M-W U test=13,5, р=0,0000.

Выявлены статистически значимые положительные корреляции между уровнем антител к СОД, к ГР, к АДА и активностью патологического процесса (Spearman R= 0,56, р=0,005; 0,67, р=0,003; 0,8, р=0,001, соответственно).

Обнаружены статистически значимые отрицательные корреляции между активностью ГП, ГДА и возрастом больных: Spearman R= -0,45, р=0,045, -0,45, р=0,05, соответственно.

1   2   3   4   5   6   7   8   9




Похожие:

14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  iconУ больных системной красной волчанкой 14. 00. 39 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2009
Работа выполнена в нии клинической и экспериментальной ревматологии рамн и гоу впо «Волгоградский государственный медицинский университет»...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  iconНа стационарном этапе восстановительной терапии 14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2011
Работа выполнена в Учреждении рамн «нии клинической и экспериментальной ревматологии рамн» и гоу впо «Волго-градский государствен­ный...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  iconРевматоидным артритом 14. 00. 39 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2009
...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  iconАвторефера т диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2009 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  icon14. 02. 05 – Социология медицины 14. 01. 11 – Нервные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011
Медицинские и социальные факторы повышения качества жизни пациентов с хронической болью
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  icon14. 02. 05 – социология медицины Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в Государственном
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  icon14. 02. 05 – социология медицины Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в Государственном
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  iconАвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2010
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  iconАвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2010
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный...
14. 01. 22 – ревматология Авторефера т диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Волгоград – 2011 Работа выполнена в нии клинической и  icon14. 02. 05 – Социология медицины Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2010 Работа выполнена в гоу впо «Волгоградский
Работа выполнена в гоу впо «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному...
Разместите кнопку на своём сайте:
Документы


База данных защищена авторским правом ©zazdoc.ru 2000-2014
При копировании материала обязательно указание активной ссылки открытой для индексации.
обратиться к администрации
Документы