Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология icon

Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология



НазваниеПоиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология
БУКАТИНА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНА
Дата конвертации11.02.2013
Размер330.91 Kb.
ТипАвтореферат
источник


На правах рукописи

БУКАТИНА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНА


ПОИСК АНТАГОНИСТОВ ПУРИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ

СРЕДИ КОНДЕНСИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ИНДОЛА

И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ


14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология


АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук


Волгоград 2012

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ, ГБУ «Волгоградский медицинский научный центр»


^ Научный руководитель:

Академик РАМН,

заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Спасов Александр Алексеевич


Официальные оппоненты:


Заслуженный деятель науки РФ,^ Резников Константин Михайлови

доктор медицинских наук,

профессор


доктор биологических наук Бугаёва Любовь Ивановна


Ведущая организация: ФГБУ НИИ Фармакологии им. В.В.Закусова РАМН


Защита диссертации состоится «7» ноября 2012 г. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ


Автореферат разослан «….» …………………. 20.. г.


Ученый секретарь

диссертационного совета, Бабаева А.Р.

доктор медицинских наук,

профессор

^ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Нарушения регуляции функциональной активности тромбоцитов, ведущие к увеличению тромбогенного потенциала крови, могут быть причиной тромбоэмболии сосудов головного мозга, легких, почек [Суслина З.А., Танашян М.М., 2003; Deepak L., Topol B.E., 2003; Кубатиев А.А., 2009]. Показано участие тромбоцитов в патогенезе столь распространённых в настоящее время заболеваний, сопровождающиеся диссеминированным внутрисосудистым свёртыванием крови [Leon C., 2004], а также атеросклероза [Rauch U. et al., 2001; Панченко Е.П., 2005], ишемической болезни сердца [Levy J.H., Smith P.K., 2000; Steimle A.E., Lange R.A., Hillis L.D., 2004; Лупанов В.П., 2005], диабетической ангиопатии [Балаболкин М.И., 2000; Bae S.H. et al., 2003; Matsuno H. et al., 2004].

К настоящему времени в клинической практике среди антиагрегантных средств широкое применение нашли препараты блокаторы P2Y12 пуриновых рецепторов тромбоцитов – тиклопидин и клопидогрель [Грацианский Н.А., 2010]. Однако такие побочные явления как развитие гематологических осложнений, аллергические реакции, кровотечений различного генеза ограничивают их назначение [Pereillo J., Maftouh M., 2002].

В настоящее время накоплен обширный фактический материал, свидетельствующий о том, что P2Y1-тромбоцитарные рецепторы могут представлять собой перспективную мишень для создания группы антитромбоцитарных препаратов с новым механизмом антиагрегантного действия [Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е., Бернсток Дж., 2002; Marcet B., Chappe V. Delmas et. el, 2004; Morales-Ramos A.I., Mecom J.S., Kiesow T.J. et. el., 2008]. Это объясняется тем, что активация данного подкласса P2Y-рецепторов на мембране тромбоцитов приводит к инициации стадии их контактной активации, при которой процесс агрегации обратим [Hechler B., Vigne P., Léon C., Breittmayer J. P. et. el, 1998].

Химический класс индолов считается перспективным для разработки гемореологических препаратов – эффективных ингибиторов агрегации тромбоцитов [Черников М.В. и др., 2006; Abbracchio М.P., Burnstock G., Boeynaems J.-M. et. el., 2006; Baurand A., Gachet C., 2008]. Учитывая данный факт, представляется интересным поиск веществ, избирательно блокирующих пуриновые рецепторы тромбоцитов, в частности, Р2Y1-рецепторы, среди новых соединений ряда индола: N-[(1-R1 -амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов. Настоящее исследование является составной частью научно-исследовательской работы «Изучение рецепторной активности синтетических гетероциклических азотсодержащих соединений» (№ государственной регистрации 01200809579) , входящей в план НИР ГБУ «Волгоградский медицинский научный центр» на 2008-2010 гг., и работы «Поиск и изучение фармакологической активности новых производных конденсированных гетероциклических систем» (№ государственной регистрации 01200609440), входящей в план НИР Волгоградского государственного медицинского университета на 2007-2012 гг. Тема утверждена на заседании Специализированного Совета университета (протокол № 10 от 25.11.2009 г.).

^ Цель исследования. Поиск антагонистов P2Y1-рецепторов среди производных ряда индола – N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов – и изучение антиагрегантных и антитромботических свойств наиболее активных веществ.

Для достижения указанной цели представляется необходимым решение следующих задач:

  1. Изучить P2Y1-антагонистическую активность новых веществ производных индола и вещества сравнения in vitro;

  2. Провести анализ зависимости между химической структурой и функциональной активностью исследованных соединений по отношению к Р2Y1 - рецепторам тромбоцитов;

  3. Исследовать острую токсичность соединений, проявляющих наибольшую активность, рассчитать их терапевтический индекс и выбрать наиболее эффективные вещества для доклинического изучения специфической фармакологической активности;

  4. Изучить влияние наиболее эффективного вещества и препаратов сравнения на показатели сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза;

  5. Оценить влияние наиболее активного соединения на вязкостные параметры крови;




  1. Исследовать антитромботические свойства наиболее активного соединения и препаратов сравнения на моделях экспериментального тромбоза сонной артерии крыс (индуцированного поверхностной аппликацией хлоридом железа (III), электрическим током), генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза на мышах;

  2. Провести оценку общетоксикологических свойств наиболее активного соединения.

^ Научная новизна.

Впервые было проведено исследование влияния новых веществ производных ряда индола – N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов – на первый подтип пуриновых рецепторов мембраны тромбоцитов. Впервые была установлена взаимосвязь между структурой новых соединений и их Р2Y1-антагонистической активностью. Установлено, что выраженность данного вида активности у замещённых амидов ряда индола определяется строением заместителей, а так же их сочетанием у атома углерода в положении 7, а у аминоспиртов ряда индола – радикалами в положении N9.

Впервые в ходе работы получены данные о влиянии соединения Sbt-119 на сосудисто-тромбоцитарный и коагуляционный гемостаз (на вязкостные характеристики крови, агрегацию, время кровотечения, коагулографические параметры) in vitro и in vivo. Показано, что вещество Sbt-119 проявляет антитромботические свойства на моделях тромбоза сонной артерии крыс, индуцированного поверхностной аппликацией хлоридом железа (III), и электрическим током, на модели генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза на мышах.

^

Научно-практическая значимость работы.

Результаты выявленных закономерностей между Р2Y1-антагонистической активностью производных индола и их химической структурой могут служить основой для направленного поиска веществ, обладающих данным видом активности. Получены данные о наличии у соединения Sbt-119 антиагрегантной активности, и способности снижать вязкость крови в условиях in vitro и in vivo. Вещество Sbt-119 обладает антитромбогенным действием на моделях экспериментальных тромбозов сонной артерии крыс, индуцированного поверхностной аппликацией хлоридом железа (III) и электрическим током, а так же на модели генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза на мышах. Соединение Sbt-119 менее выражено влияет на время кровотечения по сравнению с клопидогрелем.

^

Реализация результатов исследования.

Выявленные закономерности между химической структурой и P2Y1-антагонистической активностью конденсированных производных индола учитываются при синтезе новых соединений в НИИ физической и органической химии Южного Федерального университета. Материалы работы применяются в ГБУ Волгоградском медицинском научном центре, на кафедре фармакологии и НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета при проведении научных экспериментов. Результаты работы включены в лекционный материал кафедры фармакологии, фармацевтической химии, фармакологии и биофармации ФУВ Волгоградского государственного медицинского университета, кафедрах фармакологии Саратовского и Кубанского государственных медицинских университетов.

^

Основные положения, выносимые на защиту

  1. N-[(1-R1 -амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3 - амиды ряда индола перспективный класс соединений для поиска новых эффективных Р2Y1 – антагонистов.

  2. ^

    Соединение Sbt-119 проявляет выраженную P2Y1-антагонистическую активность.

  3. Соединение Sbt-119 оказывает антитромботическое действие в условиях целостного организма при моделировании тромбоцит-зависимых артериальных тромбозов на сонной артерии крыс (индуцированного поверхностной аппликацией хлоридом железа (III), электрическим током) и системного АДФ-индуцированного тромбоза на мышах.

^

Апробация работы.

Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на : II, III Всероссийских научно-практических семинарах для молодых учёных (Волгоград, 2010 г., 2011 г.); 68 – 70-й итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2010 – 2012 гг.); III Евразийском конгрессе по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика 2010» (Москва 2010г.); II международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2011 г.); XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2011г.).

^

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 13 работ (из них 4 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ).


^ Объем и структура работы.

Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 рисунками и 27 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (главы 2 – 6), обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 46 отечественных и 111 зарубежных источников.

^ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Объектами исследования на наличие P2Y1-антагонистической активности являлись вещества ряда индола – N-[(1-R1 -амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амиды (12 соединений) и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолы (3 соединения), синтезированные в научно-исследовательском институте физической и органической химии (НИИФОХ) Южного Федерального университета1. При проведении экспериментов использовались вещество сравнения антагонист Р2Y1-рецепторов Basilen blue («Sigma», США), а также препараты сравнения, блокирующие тромбоцитарные P2Y12-рецепторы – тиклопидин (Тиклид, «Sanofi-syntelabo», Франция) и клопидогрель («Sanofi-syntelabo», Франция).

В работе были использованы следующие реактивы и материалы: натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) («IСN», США), натрия хлорид (х.ч., «Мосреактив», Россия), изотонический раствор натрия хлорида (ЗАО «Рестерс», Россия), трис-(оксиметил)-аминометана гидрохлорид (х.ч., «Мосреактив», Россия) и кальция хлорид (ч.д.а, «Мосреактив», Россия), цитрат натрия (ч.д.а., Реахим, Россия), кислота соляная (х.ч., Россия), динатриевая соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) (Sigma, США и Reanal, Венгрия), адреналин гидрохлорид («Ренам», Россия), коллаген («Ренам», Россия), наборы для определения показателей коагулограммы «Тромбо-тест» («Технология–стандарт», Россия), «Техпластин-тест» («Технология–стандарт», Россия), «ТехФибриноген-тест» («Технология–стандарт», Россия), «АПТВ (АЧТВ)-тест» («Технология–стандарт», Россия), хлорид железа (ч., «Мореактив», Россия), хлоралгидрат (Россия), формалин (Acros organics, США), цитрат натрия (Реахим, Россия).

Исследования были выполнены на 12 кроликах породы «Шиншилла» весом 3,5-4,0 кг, 236 белых неинбредных крысах обоего пола массой 250-300 г. и 248 белых неинбредных мышах обоего пола массой 20-32 г., содержащихся в условиях вивария (температура 22-24°С, относительная влажность воздуха 40-50%) с естественным световым режимом, на стандартной диете (ГОСТ Р 50258-92). Проведение экспериментов одобрено Региональным независимым этическим комитетом при Волгоградском научном центре РАМН и Администрации Волгоградской области (протокол заседания № 108-2009 от 26.12.09) и выполнено в соответствии с принципами биоэтики, правилами лабораторной практики (GLP); соответствует этическим нормам, изложенным в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и в соответствии с приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003г. «Об утверждении правил лабораторной практики» и МЗ СССР №755 от 12.08. 1977.

Исследования in vitro и in vivo. В экспериментах in vitro соединения изучались в концентрациях 0,1; 1,0 и 10 мкМ. При выполнении исследований in vivo наиболее активное соединение Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель вводились животным перорально за два часа до эксперимента в эквимолярных дозах, соответствующих средней терапевтической дозе тиклопидина – 6,0; 11,63 и 7,32 мг/кг соответственно. Контрольные животные получали эквивалентный объем 0,9% раствор натрия хлорид.

P2Y1-антагонистическую активность веществ изучали в экспериментах in vitro методом малоуглового светорассеяния [Сакаев М.Р. и соавт., 2000] на приборе «Ласка-1К» (С.-Петербург, Россия).

С целью ранжирования соединений по степени выраженности их P2Y1-антагонистической активности в концентрации 1 мкМ был выполнен кластерный анализ с использованием вероятностного метода гистограмм [Мандель И. Д., 1988].

Показателем эффективности веществ являлась концентрация, при которой происходило ингибирование активации тромбоцитов на 20% (ЕС20), рассчитанная методом регрессионного анализа.

Влияние вещества Sbt-119 и препаратов сравнения – тиклопидина и клопидогреля – на агрегацию тромбоцитов in vitro и in vivo изучали по методу Born G. (1962) в модификации Габбасова З.А. и др. (1989) на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов НПФ «Биола» 220LA (Россия). В качестве индукторов агрегации использовали АДФ (Sigma, США) в конечной концентрации 5 мкМ, адреналин – 10 мкМ, коллаген – 50 мг/кг. Забор крови в исследованиях in vivo осуществляли из брюшной артерии крыс под хлоралгидратным (400 мг/кг) наркозом.

Оценку влияния соединения Sbt-119 и препаратов сравнения на вязкостные характеристики крови проводили методом ротационной вискозиметрии со свободно плавающим цилиндром-ротором [Доброволь-ский Н.А., 1989] на анализаторе крови реологическом АКР-2 (Россия). In vitro исследовали вязкость крови (гематокрит 45%) на модели «повышенной вязкости крови in vitro», вызванной прогреванием образцов в течении 1-го часа при 42,5 ºС [Плотников М.Б. и др., 1996] и взвеси стандартизированных отмытых эритроцитов, in vivo – кажущуюся вязкость цельной и вязкость стандартизированной крови крыс, взятой из брюшной артерии животных. По результатам динамики кажущейся вязкости цельной и стандартизированной крови, вязкости крови при моделировании синдрома гипертермии рассчитывали индекс агрегации (ИАЭ, у.е.) [Киричук В.Ф. и др., 2004].

Хронометрически, на гемокоагулометре «SOLAR» (Белоруссия) с использованием наборов реактивов производства («Технология–стандарт», Россия) были определены показатели коагулограммы: тромбиновое, протромбиновое, активированное парциальное тромбопластиновое время и содержание фибриногена [Баркаган З.С., Момот А.П., 1999].

^ Антитромботическая и тромболитическая активности веществ изучались на образцах цельной крови крыс по методу D.A. Goroga (2009) на приборе «Global Thrombosis Test» (Montrose Diagnostics Ltd, Великобритания). Для усиления пуринового механизма активации тромбоцитов в пробирку предварительно вносили 0,5 мл раствор, содержащего 5 мкМ АДФ. Антитромботическую и тромболитическую активности веществ оценивали по времени наступления окклюзии (OT, сек.) и лизиса (LT,сек.).

На моделях артериальных тромбозов, индуцированных аппликацией 50% раствора хлорида железа (III) [Kurz K.D., 1990] и воздействием анодного электрического тока [Guglielmi G., Vinuela F., Sepetka I., Macellari V., 1991] на сонную артерию крыс оценивалась динамика снижения линейной скорости кровотока в области повреждённого сосуда на 50; 90; 95 и 99,9 %. Для исследования влияния соединений на время образования тромба использовали ультразвуковой компьютеризированный аппарат «Минимакс-Доплер–К» (Санкт-Петербург).

Модель генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза на мышах была воспроизведена в соответствии с методикой Di Minno (1983). В качестве тромботического агента использовали раствор АДФ в дозе 300 мг/кг. При морфологическом исследовании легких мышей оценивали наличие признаков тромбообразования в стенке артериальных сосудов мышечного типа. Гистологические препараты документировали цифровой камерой Olympus (Japan, 4.0 мегапикселей) на базе микроскопа Micros (Austria) c использованием объектива х10, х40 и окуляра х10.2

Влияние соединения Sbt-119 и препаратов сравнения тиклопидина и клопидогреля на время кровотечения изучалось на мышах [Liu Y., L Jennings N., M Dart A., Du X.-J., 2012]. Регистрировалось время остановки кровотечения из хвостовой вены животных.

^ Острую токсичность соединений изучали на мышах при внутрибрюшинном введении. Величину LD50 рассчитывали по методу Личфилда-Вилкоксона.

Изучение общетоксикологических свойств проводили с использованием схемы многотестового наблюдения по С. Ирвину [Irwin S., 1964]. Вещество Sbt-119 вводили однократно внутрибрюшинно лабораторным мышам в возрастающих дозах. Наблюдение проводили в течение трех часов после введения соответствующей дозы соединения.

Статистическая обработка данных. Обработку экспериментальных данных проводили с помощью встроенных функций программы Excel из пакета Office XP (Microsoft, США) (среднее арифметическое значение, стандартная ошибка средней арифметической), программ «Statistica 6.0» (StatSoft, США) и «Graph.Pad.Prism.5.0» (США) с применением t-критерия Манна-Уитни, дисперсионного анализа по Краскеллу-Уолису с постестом Данна, точного метода Фишера.

^ Результаты исследования и их обсуждение

В ходе проведённого исследования было установлено, что среди ряда индола – N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов 1 из 12 соединений по выраженности P2Y1-блокирующей активности превосходило вещество сравнения P2Y1-блокатор Basilen blue на 15,5% (р≤0,05). Три вещества проявили умеренную активность (24,9%), уступая Basilen blue в 1,3 – 1,6 раза (р>0,05). У остальных соединений P2Y1-антагонистический свойства были или слабо выраженные или отсутствовали.

Таблица 1

Распределение исследуемых веществ по степени их P2Y1-антагонистической

активности in vitro

Группа

соединений

Количество соединений (%)

Высоко

активные

Умеренно

активные

Низко

активные

Неактивные

Производные N-[(1-R1 -амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3 –амидов

8,5

24,9

41,7

24,9

Производные 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолы

0

66,6

33,4

0

В группе веществ производных 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов 2 из 3 веществ статистически недостоверно в 1,04 – 1,2 раза уступали Basilen blue, и одно соединение было низкоактивным (табл. 1).

При анализе зависимости подавления Р2Y1-обусловленной активации тромбоцитов изучаемых соединений от их химической структуры было установлено, что для проявления данного вида биологической активности в ряду замещённых амидов производных индола имело значение строение заместителей, а так же их сочетание у атома углерода в положении 7. Так наиболее высокую активность демонстрировали вещества, имеющие в положении С7 морфолинопропиловый и 4-метифенильный заместители. В ряду аминоспиртов производных индола активность веществ определялась радикалами в положении N9. При этом, наличие метил-(n-бутил)-аминового заместителя или полная его замена на гетероциклический азотосодержащий заместитель (N-азепин) приводило к увеличению P2Y1-антагонистической активности веществ.

По результатам поиска среди производных индола были выявлены три наиболее перспективных для дальнейшего исследования соединения под лабораторными шифрами Sbt-119, Sbt-815 и Sbt-820.

При изучении для данных веществ P2Y1-антагонистического эффекта от концентрации было выявлено наиболее активное соединение – Sbt-119.

Таблица 2

Влияние соединений Sbt-119, Sbt-815, Sbt-820 и Basilen blue на P2Y1-опосредованную активацию тромбоцитов in vitro в диапазоне концентраций 10-0,1 мкМ (M±m)

Соединение

Подавление активации тромбоцитов, ∆%

IC20, М

^ Концентрация, мкМ

10

1

0,1

Sbt-119

-27,8±2,17*, β

-24,5±0,24*, β

-12,8±1,18

5,8×10-7

Sbt -815

-23,6±5,81*

-20,5±0,67*

-11,3±1,98

1,7×10-6

Sbt -820

-25,9±1,38*

-17,3±1,16*

-4,7±1,75

1,8×10-6

^ Basilen blue

-23,0±1,12*

-21,6±1,01*

-9,9±2,32

1,9×10-6

*Статистически значимые отличия относительно контрольного измерения (p≤0,05; критерий Манна-Уитни); βСтатистически значимые отличия относительно вещества сравнения Basilen blue (p≤0,05; критерий Краскелла-Уолиса с постестом Данна)

Так, в концентрациях 10,0; 1,0 мкМ вещество Sbt-119 по степени ингибирования активации тромбоцитов достоверно на 20,8 и 13,4% превышало Basilen blue соответственно. В концентрации 0,1 мкМ Sbt-119 по силе проявления P2Y1-антагонистического эффекта статистически незначимо в 1,2 раза было активнее вещества сравнения. В диапазоне 0,1 – 10,0 мкМ соединение Sbt-119 в 1,13 – 1,17 и в 1,07 – 2,7 раза по уровню P2Y1-блокирующей активности превосходило соединения Sbt-815 и Sbt-820 соответственно (р>0,05).

По показателю IC20, рассчитанному на основании данных результатов, соединение Sbt-119 в 3,2 – 3,4 раза было активнее и вещества сравнения Basilen blue, и опытных соединений Sbt-820, Sbt-815 (табл. 2).

Исходя из полученных значений LD50, соединение Sbt-119  в 1,5 и 1,3 раза было менее токсичным, чем Sbt-820 и Sbt-815 соответственно. По широте терапевтического действия вещество Sbt-119 в среднем в 1,4 раза превосходило эти соединения. Поэтому для дальнейшего изучения фармакологических эффектов среди соединений, проявивших P2Y1-антагонистическую активность, было выбрано вещество Sbt-119:


N-[(1-морфолинопропил - амино) карбонил-2-(1-этил-1H-индол-3-ил) винил]-4-метилфенил - амид гидрохлорид


При изучении влияния вещества Sbt-119 на агрегацию тромбоцитов в диапазоне концентраций 0,1–10,0 мкМ in vitro было установлено дозозависимое подавление процесса агрегации. С увеличением концентрации вещества его способность ингибировать агрегацию возрастала в среднем в 1,3 раза относительно контрольного измерения (р≤0,05). В концентрации 0,1 мкМ данное соединение по выраженности антиагрегантного эффекта недостоверно в 3,1% превосходило тиклопидин (табл. 3).

Таблица 3

Влияние соединений Sbt-119 и препарата сравнения тиклопидина на степень подавления агрегации тромбоцитов плазмы интактных кроликов, индуцированной АДФ (5 мкМ) in vitro (M±m)

Соединение

Антиагрегантная активность, ∆%

концентрация, мкМ

10

1

0,1

Sbt-119

-64,2±2,86*

-52,0±6,30*

-39,1±4,59*

тиклопидин

-70,7±8,53*

-60,9±6,32*

-37,9±11,09*

*Статистически значимые отличия относительно контрольного измерения (p≤0,05; критерий Краскелла-Уолиса с постестом Данна)

В условиях in vivo вещество Sbt-119 на 50,1% эффективнее тиклопидина ингибировало АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов (р≤0,05). При воздействии индуктора коллагена соединение Sbt-119 статистически незначимо (на 0,6% и 2,0%) превосходило по степени антиагрегантной активности препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель соответственно. Вещество Sbt-119 на 3,2% сильнее тиклопидина подавляло адреналин-индуцированную агрегацию, уступая при этом на 14,5% клопидогрелю (р>0,05) (табл. 4).


Таблица 4

Влияние соединения Sbt-119, тиклопидина и клопидогреля (в эквимоляльных дозах) при пероральном введении на АДФ-, коллаген- и адреналин - индуцированноую агрегацию тромбоцитов интактных крыс (M±m)


^ Изучаемое вещество

Антиагрегантная активность, ∆%

индукторы агрегации

АДФ (5мкM)

коллаген (50мкг/мл)

адреналин (10мкМ)

Sbt-119

-72,8±8,27* χ

-99,7±0,16*

-84,6±8,75*

тиклопидин

-36,0±6,86 γ

-99,1±1,05*

-81,9±11,45*

клопидогрель

-84,1±7,06*

-97,1±2,92*

-99,0±1,07*
*Статистически значимые отличия относительно контроля; γСтатистически значимые отличия относительно клопидогреля; χСтатистически значимые отличия относительно тиклопидин (p<0,05; критерий Краскелла – Уолиса с постестом Данна)

Примечание: дозы соединений эквимоляльны дозе тиклопидина 6 мг/кг

При исследовании веществ, оказывающих антитромботические свойства, рекомендуются тесты, дающие интегральное представление о возможных изменениях коагулогического потенциала крови, как зависящих, так и не зависящих от влияния на функциональную активность тромбоцитов, а именно: тромбиновое время, протромбиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время, уровень фибриногена [Баркаган З.С.,Момот А.П., 1999]. При однократном введении соединения Sbt-119 и препаратов сравнения не было получено статистически значимых изменений показателей тромбинового и протромбинового времени. Наблюдаемое изменение АПТВ в группах животных, получавших как Sbt-119, тиклопидин и клопидогрель не превышали норму – 25 – 38с. Содержание фибриногена уменьшалось по сравнению с контролем в среднем на 12,0% для Sbt-119 и клопидогреля, а в пробах, содержащие тиклопидин – на 6,4% (данные статистически недостоверны).

Одним из серьёзных побочных эффектов, существующих на данный момент для антиагрегантных средств, является их способность увеличивать риск развития кровотечений [Gao Z.-G., Hechler B., Besada P. et el., 2008]. При исследовании влияния вещества Sbt-119 на длительность кровотечения было установлено, что данное вещество, так же как и препараты сравнения клопидогрель и ацетилсалициловая кислота в 3,6; 5,8 и 5,0 раз достоверно относительно контроля увеличивали время кровотечения у мышей соответственно.


Рис.1. Влияние соединения Sbt-119 и препаратов сравнения тиклопидина, клопидогреля и ацетилсалициловой кислоты на длительность времени кровотечения мышей

Обозначения: по оси абсцисс – группа животных; *Статистически значимые отличия относительно контрольной группы животных (p<0,05; критерий Краскелла – Уолиса с постестом Данна). Примечание: дозы соединений эквимоляльны дозе тиклопидина (6 мг/кг) Примечание: дозы соединений эквимоляльны дозе тиклопидина 6 мг/кг





Тиклопидин так же превосходил контрольные значения, но достоверных отличий у данной группы животных не наблюдалось. Sbt-119 по отношению к клопидогрелю и ацетилсалициловой кислоты сокращал время кровотечения в среднем в 1,3 – 1,8 раза. Однако полученные данные были статистически недостоверны (рис. 1).

Одним из необходимых этапов исследования веществ, влияющих на систему гемостаза в целом, в том числе и на его сосудисто-тромбоцитарный и коагуляционный его компоненты, является оценка вязкостных свойств крови [Добровольский Н.А. и др., 1998]. Соединение Sbt-119 оказывало стабилизирующее действие на вязкость образцов цельной и стандартизированной (гематокрит 45%) крови в условиях in vitro и in vivo, превосходя препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель при средних и низких скоростях сдвига. Так, in vitro вещество Sbt-119 по способности снижать вязкость при скорости сдвига 50с-1 в 1,4 и 1,5 раза превосходило тиклопидин и клопидогрель соответственно, при 30 с-1, 10 с-1 Sbt-119 – только клопидогреля в 1,7; 1,6 раза (р≤0,05). В условиях in vivo вещество Sbt-119 достоверно было активнее тиклопидина и клопидогреля на скорости сдвига 30 с-1 на 3,0 и 11,0% соответственно. Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель на вязкость взвеси отмытых эритроцитов in vitro не влияли. Поэтому можно предположить, что вещество Sbt-119, так же как тиклопидин и клопидогрель, оказывают действие на плазменный компонент вязкости крови.

Опираясь на полученные результаты, в дальнейшем было проведено исследование антитромботических и тромболитических свойств соединения Sbt-119 и препаратов сравнения тиклопидина и клопидогреля в условиях целостного организма.

На модели артериального тромбоза, индуцированного электрическим током, соединения Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель увеличивали время до полной окклюзии сонной артерии.


Рис. 2. Влияние соединения Sbt-119 и препаратов сравнения тиклопидина и клопидогреля на динамику скорости кровотока каротидной артерии крыс (модель артериального тромбоза, индуцированного электрическим током)

Примечание: дозы соединений эквимоляльны дозе тиклопидина 6 мг/кг.



Соединение Sbt-119 относительно контроля статистически значимо в 1,6 раза превосходило значения времени наступления окклюзии. Сравнивания полученные данные об антитромботической активности соединения Sbt-119 с тиклопидином и клопидогрелем было выявлено, что опытное соединение по эффективности достоверно превосходило тиклопидин в среднем в 1,6 раза и уступало клопидогрелю в 1,7 раза. При этом, среди препаратов сравнения только клопидогрель приводил к увеличению времени снижения скорости течения крови в повреждённой области сосуда в 3,4 – 3,8 раза (р≤0,05). Показатели влияния тиклопидина на изменение скорости кровотока не значительно в 1,2 – 1,5 раза превосходили показатель контроля (Рис. 2).

Таким образом, согласно результатам действия вещества Sbt-119 и препаратов сравнения тиклопидина, клопидогреля на динамику скорости кровотока и влияния на время развития тромбоза в области повреждённого сосуда при моделировании тромбозов, индуцированных электрическим током соединения можно расположить следующим образом: клопидогрель > Sbt-119 > тиклопидин.

На модели артериального тромбоза, индуцированного хлоридом железа, вещество Sbt-119 достоверно увеличивало время развития окклюзии в повреждённой области сосуда в 1,8 – 2,6 раза относительно контроля. Сравнительный анализ результатов динамики изменения скорости кровотока между группами животных, получавших опытное соединение и тиклопидин, было установлено, что Sbt-119 по степени выраженности антитромботического эффекта статистически значимо превосходило препарат сравнения тиклопидин в среднем на 18,4% .



Рис. 3. Влияние соединения Sbt-119 и препаратов сравнения тиклопидина и клопидогреля на динамику скорости кровотока каротидной артерии крыс (модель артериального тромбоза, индуцированного аппликацией хлорида железа (III))

Примечание: дозы соединений эквимоляльны дозе тиклопидина 6 мг/кг.




Так же вещество Sbt-119 на данной модели артериального тромбоза по степени выраженности антитромботической активности статистически незначимо на 5,8 – 6,7% увеличивало время тромбообразования относительно препарата сравнения клопидогреля (рис. 3).

Таким образом, исследованные соединения по степени выраженности антитромботического эффекта на данной модели артериального тромбоза можно расположить следующим образом: клопидогрель = Sbt-119 > тиклопидин.

Модель генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза позволяет оценить влияние соединений на процесс глобальной внутрисосудистой агрегации тромбоцитов, приводящей к множественному тромбозу паренхиматозных органов и сопровождающуюся нарушениями дыхательной функции легких и выраженными двигательными нарушениями вплоть до паралича задних конечностей и гибели животного [Ulrich J.H., 2012]. Соединение Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель повышали выживаемость животных, при этом вещество Sbt-119 было эффективнее в 1,2-1,3 клопидогреля и тиклопидина соответственно, что свидетельствовало о наличии выраженных антитромботических свойств у данного соединения. То есть, согласно результатам выживаемости животных по эффективности подавления процесса системного тромбообразования на данной экспериментальной модели исследованные соединения можно расположить следующим образом: Sbt-119 > клопидогрель > тиклопидин. Результаты гистологического исследования показали, что в лёгких контрольной группы животных отмечалось выраженное полнокровие и сладжирование эритроцитов в просветах артериол межальвеолярных перегородок. В просвете альвеол диапедезные кровоизлияния.


А

Б

Рис. 4. Гистологические срезы лёгкого контрольной группы животных и групп, получавших Sbt-119, препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель Обозначения: А – контроль (окраска гематоксилин и эозином); Б –тиклопидин (окраска по Маллори) ; В – клопидогрель (окраска по Маллори); Г – соединение Sbt-119 (окраска гематоксилин и эозином).




В

Г


В кровеносных сосудах среднего калибра определялись пристеночные смешанные тромбы. В более мелких кровеносных сосудах – облитурирующие эритроцитарные тромбы (рис. 4А). При гистологическом исследования микропрепаратов легочной ткани опытного вещества и клопидогреля были обнаружены единичные пристеночные тромбы (рис. 4В, 4Г) признаки нарушения внутриорганной гемодинамики, а в микропрепаратах тиклопидина – множественные пристеночные и обтурирующие тромбы (эритроцитарные и смешанные), массивные кровоизлияния и деструктивные изменения стенки альвеол с микроинфарктами (рис. 4 Б).

При исследовании антитромботической и тромболитической активности вещества Sbt-119 и препаратов сравнения методом D.A. Goroga было установлено, что соединение Sbt-119 по антитромботическому эффекту превосходило препарат сравнения тиклопидин на 48,0% (р≤0,05) и клопидогрель на 12,4% (р>0,05). По времени лизиса тромбинового сгустка достоверных отличий между группами, получавшими соединение Sbt-119, тиклопидин и клопидогрель не наблюдалось.

При изучении нейротоксических свойств соединения Sbt-119 после его однократного внутрибрюшинного введения было установлено что, опытное вещество во всех исследуемых дозах практически не влияло на эмоциональное поведение животных, нервно-мышечную возбудимость, не вызывало развитие таких побочных вегетативных эффектов таких как птоз и экзофтальм. Начиная с дозы 150 мг/кг, наблюдались обратимые единичные признаки нарушения двигательной координации и поведенческих реакций. В максимально вводимых дозах соединения Sbt-119 (200 и 220 мг/кг) у животных регистрировались симптомы нейротоксического эффекта опытного вещества на дыхательный, терморегуляторный, болевой центры, а так же на нейродвигительную проводимость, что подтверждалось урежением дыхания, снижением ректальной температуры и болевой чувствительности, признаками угнетения мышечной координации и реактивности, а так же снижением рефлексов.

Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что изученные вещества, относящиеся к классу производных индола, а именно к N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидам и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолам, проявляют P2Y1-антагонистическую активность различной степени выраженности. При этом, было установлено, что выраженность данного вида активности в ряду замещённых амидов производных индола определяется строением заместителей, а так же их сочетанием у атома углерода в положении 7, а у аминоспиртов ряда индола – радикалами в положении N9. Так наиболее высокую активность демонстрируют вещества, имеющие в положении С7 морфолинопропиловый и 4-метифенильный заместители. Наличие метил-(n-бутил)-аминового заместителя или полная его замена на гетероциклический азотосодержащий заместитель в положении приводит к увеличению P2Y1-антагонистической активности.

На основании вышеизложенного выявлены три наиболее активных соединений Sbt-119, Sbt-815 и Sbt-820. Однако только вещество Sbt-119, обладающее более высоким P2Y1-антагонистическим эффектом, низкой токсичностью и по широте терапевтического действия превосходящее Sbt-815 и Sbt-820, отобрано для дальнейшего углубленного фармакологического исследования.

При изучении влияния соединения Sbt-119 на сосудисто-тромбоцитарный и коагуляционный звеньев гемостаза установлено, что данное вещество проявляет антиагрегантную активность как in vitro, так и in vivo. При этом по ингибированию агрегации тромбоцитов in vitro соединение Sbt-119 активнее препарата сравнения тиклопидин в концентрации 0,1 мкМ в 1,03 раза. В условиях in vivo вещество Sbt-119 значимо превосходит только тиклопидин (на 50,1%) по подавлению АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов.

Вещество Sbt-119 по сравнению с препаратами сравнения (клопидогрелем и ацетилсалициловой кислотой) менее выраженно увеличивает время кровотечения в исследования влияния данных веществ на показатель длительности кровотечения из хвостовой вены мышей. Это позволяет предполагать о способности опытного вещества снижать риск кровотечений.

Соединение Sbt-119 снижает вязкость образцов цельной и стандартизированной (гематокрит 45%) крови в условиях in vitro и in vivo, превосходя препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель при средних и низких скоростях сдвига. При этом, на вязкость взвеси эритроцитов вещество Sbt-119 не влияет, что указывает о действии на плазменный компонент вязкости крови.

При исследованиях антитромботической активности в условиях целостного организма соединение Sbt-119 достоверно превосходит тиклопидин на моделях артериальных тромбозов, индуцированного хлоридом железа (в среднем на 16,7%) и электрическим током (1,5 – 2,5 раза), а так же и при моделировании тромбоза механическим методом («Global Thrombosis Test») (на 48,0%). Кроме того, соединение Sbt-119 в 1,2; 1,3 раза клопидогреля и тиклопидина соответственно уменьшает смертность мышей при системном АДФ-индуцированном тромбозе.

Учитывая выраженную антиагрегантную и антитромботическую эффективность вещества Sbt-119 как в условиях in vitro, так и in vivo, можно считать перспективным дальнейшее изучение у данного соединения фармакологических и токсикологических свойств.

Выводы

  1. В результате проведенного скрининга 15 соединений среди замещённых амидов и аминоспиртов ряда индола: N-[(1-R1 -амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов было обнаружено 6 (40,0 %) веществ антагонистов P2Y1 рецепторов, из которых 1 соединение превосходило вещество сравнения, P2Y1-антагонист, Basilen blue по степени выраженности данного вида активности.

  2. P2Y1-блокирующая активность у замещённых амидов ряда индола определяется строением заместителей, а так же их сочетанием у атома углерода в положении 7. Наиболее высокую активность демонстрируют вещества, имеющие в положении С7 морфолинопропиловый с 4-метифенильным заместителем. У аминоспиртов ряда индола активность веществ определяется радикалами в положении N9. Наличие метил-(n-бутил)-аминового заместителя или полная его замена на гетероциклический азотосодержащий заместитель (N-азепин) приводит к увеличению данного вида биологического действия.

  3. Соединение Sbt-119 по влиянию на P2Y1-рецепторы тромбоцитов, превосходит в 3,0 раза по показателю IC20 вещество сравнения Basilen blue. Соединение Sbt-119 проявляет выраженную антиагрегантную активность. По ингибированию АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов соединение Sbt-119 превосходит препарат сравнения тиклопидин в 2,0 раза. Вещество Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин, клопидогрель в одинаковой степени подавляют адреналин- и коллаген-индуцированной агрегацию тромбоцитов.

  4. Вещество Sbt-119 снижает вязкость крови в условиях in vivo, а так же при моделировании экспериментальной патологии in vitro, сопровождающейся развитием синдрома «повышенной вязкости крови и не влияет на показатели вязкости эритроцитов.

  5. На модели артериального тромбоза, индуцированного аппликацией хлоридом железа (III) сонной артерии крыс, активность соединения Sbt-119 превосходит препарат сравнения тиклопидин в 1,3 раза. На модели артериального тромбоза сонной артерии крыс, индуцированного электрическим током, соединение Sbt-119 по выраженности антитромботических свойств в 2,5 раза эффективнее тиклопидина.

  6. Вещество Sbt-119 увеличивают выживаемость животных на модели генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза, при этом его антитромботическая активность превышает таковую у тиклопидина и клопидогреля 1,3 и 1,2 раза соответственно. При этом, результаты гистологического исследования микропрепаратов срезов легочной ткани показали, что соединение Sbt-119 резко снижает количество пристеночных тромбов с сохранением следовых признаков нарушения внутриорганной гемодинамики по сравнению с тиклопидином.

  7. Исследование общетоксикологических свойств соединения Sbt-119 показало, что, начиная с восемнадцатикратного увеличения терапевтической дозы, угнетаются мышечная координация и реактивность, снижаются рефлексы, ректальная температура и болевая чувствительность, урежается частота дыхания.


^ СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ


  1. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Спасов. А.А., Суздалев. К.Ф. Антитромботическая и антиагрегантная активности нового P2Y1-антагониста – соединения Sbt-119 ex и in vivo / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, А.А. Спасов, К.Ф. Суздалев. // Вестник ВолгГМУ. – 2011. – № 4. – С. 19 – 21.

  2. Анисимова В.А., Толпыгин И.Е., Спасов А.А., Яковлев Д.С., Митина Т.М. и др. Синтез и фармакологическая активность 10-алкиламиноэтил-2,3,4,10-тетрагидропиримидино[1,2,- a]бензоимидазолов / В.А. Анисимова, И.Е. Толпыгин, А.А. Спасов, Д.С. Яковлев, Т.М. Митина и др. // Химико-фармацевтический журнал. – 2012. – Т. 46. – № 6. – С. 54 - 59.

  3. Анисимова В.А., Спасов А.А., Косолапов В.А., Толпыгин И.Е., Яковлев Д.С., Митина Т.М. и др. Синтез и фармакологи активность хлоридов 3 – (N,N – дизамещённых) ацетамидов – 1– N – 2– аминобензимидазолия / В.А. Анисимова, И.Е. Толпыгин, А.А. Спасов, В.А. Косолапов, Д.С. Яковлев, Т.М. Митина и др. // Химико-фармацевтический журнал. – 2012. – Т. 46. – № 8. – С. 52 - 58.

  4. Спасов А.А., Яковлев Д.С., Букатина Т.М. P2Y1-рецепторы и их влияние на процессы агрегации тромбоцитов / Спасов А.А., Яковлев Д.С., Букатина Т.М. //Регионарное кровообращение и микроцеркуляция. – 2012. – Т. 43. – № 3.

  5. Митина Т.М., Стуковина А.Ю. Антиагрегантная активность соединения 119 на модели артериального тромбоза, индуцированного хлоридом железа (III) / Т.М. Митина, А.Ю. Стуковина // Материалы II Всероссийского научно-практического семинара для молодых учёных « Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии». Приложение Вестник ВолГМУ. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ. 2010. С. 102-103.

  6. Митина Т.М., Стуковина А.Ю. Влияние новых антиагрегантных соединений производных индола на длительность кровотечения / Т.М. Митина, А.Ю. Стуковина // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 68-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием посвященной 75-летию ВолГМУ. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ. – 2010. – С. 182 - 183.

  7. Митина Т.М., Стуковина А.Ю., Кучерявенко А.Ф., Суздалев К.Ф. Изучение влияния нового производного индола на функциональную активность тромбоцитов / Т.М. Митина, А.Ю. Стуковина, Кучерявенко А.Ф., К.Ф. Суздалев // III Евразийский конгресс по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика-2010»: Сборник материалов конгресса. – М. 2010. – Т. № 3. – С. 379 - 381.

  8. Митина Т.М., Яковлев Д.С. Изучение P2Y1- антагонистических свойств новых производных индола / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев // II международная научно-практическая конференция «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». Сборник статей под редакцией Кудинова А.П., Крылова Б.В. – Санкт-Петербург: Из-во Политехнического университета. – 2011. – Т. 3. – С. 26 - 30.

  9. Митина Т.М., Яковлев Д.С. Влияние соединения 119 на агрегационную активность тромбоцитов ex vivo / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 69-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ. – 2011.

  10. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Суздалев К.Ф. Антитромботическая активность соединения 119 – антагониста P2Y1 рецепторов / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, К.Ф. Суздалев // XVIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса. – М. – 2011. – С. 461 - 462.

  11. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Анисимова В.А., Толпыгин В.А. Изучение P2Y1 – антагонистической активности новых хлорид-3-(N,N-дизамещённых) ацетамидов -1-R-2- аминобензимидазолия / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, В.А. Анисимова, В.А. Толпыгин // Материалы II Всероссийского научно-практического семинара для молодых учёных « Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии». Приложение Вестник ВолГМУ. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ. – 2011. – С. 14 - 15.

  12. Букатина Т. М., Яковлев Д. С., Спасов. А. А., Суздалев. К. Ф. Антитромботическая и тромболитическая активность соединения Sbt-119 на модели in vitro (Gorog Trombosis Test) / Т. М. Букатина, Д. С. Яковлев, А. А. Спасов, К. Ф. Суздалев. // Волгоградский научно-медицинский журнал. –2012. – № 2. – С 12 -14.

  13. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Суздалев. К.Ф. Антитромботическая активность соединения Sbt -119 на модели артериального тромбоза / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, К.Ф. Суздалев. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 70-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ. – 2012. – С. 325- 326.

1Выражаем благодарность к.х.н., научному сотруднику К.Ф. Суздалеву за любезно предоставленные субстанции веществ.

2 Выражаем благодарность заведующему кафедрой патологической анатомии ВолгГМУ д.м.н., доценту А.В. Смирнову за содействие в проведении исследования.





Похожие:

Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconНаправленный поиск новых блокаторов 5-ht 3 -рецепторов среди производных индола и бензимидазола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Рецепторов среди производных индола и бензимидазола и изучение их фармакологических свойств
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconНаправленный поиск и фармакологические свойства веществ с антиоксидантной активностью среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена в гоу впо «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconИзучение фармакологической активности производных пирроло[1, 2-а]бензимидазола, проявляющих антиоксидантные и антирадикальные свойства 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Изучение фармакологической активности производных пирроло[1, 2-а]бензимидазола, проявляющих антиоксидантные
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconАнтидепрессивная активность и механизм действия новых производных пиримидина и аденина 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена в нии фармакологии гоу впо «Волгоградский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития рф»
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconНейропротекторные свойства и механизм действия новых производных аналогов гамма-аминомасляной кислоты 14. 00. 25 фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена на кафедре фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей гоу впо «Волгоградский государственный...
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconЭндотелиопротективные свойства производных гамк при недостаточности половых гормонов 14. 03. 06. фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена на кафедре фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей, нии фармакологии гоу впо «Волгоградский...
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconПротивовирусные и иммунотропные свойства новых производных аденина 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Защита состоится 17 февраля 2010 года в 11 часов на заседании диссертационного совета д 208. 008. 02 при гоу впо «Волгоградский государственный...
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconСравнительная характеристика психотропных свойств солей и композиций фенибута с органическими кислотами 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный...
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconКлиническая эффективность и фармакоэпидемиология лекарственных средств у детей с аллергическим ринитом 14. 03. 06 фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена в гоу впо «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения
Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойств 14. 03. 06 Фармакология, клиническая фармакология iconКлиническая эффективность и аспекты механизма действия батиона (антитела к рецептору инсулина) у больных с сахарным диабетом типа 2 14. 00. 25 фармакология, клиническая фармакология
Работа выполнена в гоу впо «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»
Разместите кнопку на своём сайте:
Документы


База данных защищена авторским правом ©zazdoc.ru 2000-2014
При копировании материала обязательно указание активной ссылки открытой для индексации.
обратиться к администрации
Документы